磁珠固定化酶和LC-MS/MS筛选鉴定虎杖中的胰脂肪酶抑制剂
【出 处】:
【作 者】:
陈廷贵
魏煜如
张立伟
化学生物学与分子工程教育部重点实验室山西大学分子科学研究所
太原030006
【摘 要】肥胖严重危害着人类的健康,各种减肥药物和替代疗法正在不断研发之中。本文首先结合单因素实验,利用响应面分析法,优化了羧基磁珠固定化胰脂肪酶合成条件,对其结构、稳定性、专一性及重复性进行了验证,然后通过该固定化酶筛选出了天然植物虎杖中的胰脂肪酶抑制剂,最后通过分子模拟对不同抑制类型抑制剂结合位置进行了预测。结果表明:缓冲液pH值7.48、PL浓度20.32 mg/mL、温度35.40℃为最佳合成条件,胰脂肪酶成功固定于羧基磁珠之上,且储存2周后酶活仍保持80%以上,可特异性筛选出阳性抑制剂,重复利用五次后酶活仍保持50%以上。从虎杖醇提水沉物中共筛选出6个胰脂肪酶抑制剂,经LC-MS/MS鉴定和混合标准品确认,共鉴定出4个胰脂肪酶抑制剂,其IC50值和抑制类型分别为大黄素(72.3±2.4μg/mL,非竞争性抑制)、白藜芦醇(195.5±3.6μg/mL,混合型抑制)、大黄素甲醚(168.8±3.4μg/mL,反竞争性抑制)和大黄素-8-O-β-D-葡萄糖(234.3±5.2μg/mL,非竞争性抑制),其中白藜芦醇、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖是新发现的胰脂肪酶抑制剂。分子模拟预测出不同抑制类型抑制剂分别结合于胰脂肪酶的两个位置。